背景：顱腦外傷（TBI）是世界范圍內(nèi)威脅生命的疾病。大多數(shù)中國(guó)人由于運(yùn)動(dòng)受傷，辦公室或家中意外摔倒以及摩托車受傷而患有TBI。由于社會(huì)對(duì)疾病的了解不多，因此TBI被稱為“沉默流行病"。 TBI后繼發(fā)性腦損傷引起病理，生理和生物學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致腦功能障礙。生物和化學(xué)過(guò)程通常觸發(fā)連鎖反應(yīng)，可導(dǎo)致炎癥細(xì)胞，能量缺乏，興奮性毒性，細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激。氧化應(yīng)激在上述過(guò)程中起重要作用。氧化會(huì)增強(qiáng)炎癥和其他反應(yīng)，因此促進(jìn)炎癥和其他反應(yīng)會(huì)加劇氧化應(yīng)激并形成惡性循環(huán)。氧化應(yīng)激在TBI后一小時(shí)發(fā)生，并立即成為病理反應(yīng)。因此，抗氧化劑策略是治療急性TBI的關(guān)鍵。由于神經(jīng)膜的簡(jiǎn)單過(guò)氧化作用，大腦容易受到氧化損傷。它們富含脂肪酸，容易被氧化，大腦組織需要大量的氧氣。它占總耗氧量的20％。大腦富含脂質(zhì)，使其更容易受到自由基的破壞?；钚匝酰≧OS），例如超氧陰離子，羥基自由基和過(guò)氧化氫（H2O2），被認(rèn)為是參與細(xì)胞生長(zhǎng)和分化信號(hào)傳遞的第二信使。如果ROS的產(chǎn)生和去除不平衡，則會(huì)釋放生物系統(tǒng)中的氧化應(yīng)激。過(guò)量的ROS產(chǎn)生是在TBI發(fā)展中引起氧化應(yīng)激的重要因素。細(xì)胞在有氧環(huán)境中產(chǎn)生過(guò)氧化氫，超氧陰離子，羥基自由基和其他活性氧。這些自由基可以與生物分子相互作用，例如DNA，碳水化合物，蛋白質(zhì)，脂質(zhì)，并破壞各種細(xì)胞成分。大腦富含抗氧化酶，例如過(guò)氧化氫酶（CAT），超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH），可防止氧化損傷。同時(shí)，丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSSG）在腦組織中引起氧化應(yīng)激。在氧化條件下，兩個(gè)GSH分子提供電子并將其轉(zhuǎn)換為GSSG。 GSH/GSSG摩爾比是很強(qiáng)的氧化應(yīng)激和疾病風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)。不幸的是，TBI的治療效果遠(yuǎn)不能令人滿意，因?yàn)槠洳∫蚴怯筛叨葟?fù)雜和相互作用的機(jī)制觸發(fā)的。西藥的抗氧化策略失敗了?？茖W(xué)家已經(jīng)開(kāi)始從中草藥中尋找具有潛在創(chuàng)新性的植物成分，以進(jìn)行抗氧化劑治療。近年來(lái)，大黃有效地預(yù)防了由嚴(yán)重腦損傷引起的腦功能障礙。大黃具有抑制大鼠腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化的作用。大黃可以顯著減少DNA段化，這在乳酸脫氫酶釋放和細(xì)胞凋亡中起關(guān)鍵作用。近年來(lái)，大黃已被用于治療腦部創(chuàng)傷并取得了令人滿意的結(jié)果。大黃作為大黃中重要的活性成分，具有豐富的有效氧化特性。但是，TBI治療的機(jī)制仍不清楚。因此，本研究旨在確定大黃酸的抗氧化作用，并進(jìn)一步確定大黃酸是否可以用作大黃的靶向治療材料來(lái)治療TBI。

      方法：動(dòng)物和外科手術(shù)：在標(biāo)準(zhǔn)溫度22±2℃，12-12明暗循環(huán)，相對(duì)濕度50±10％的標(biāo)準(zhǔn)條件下飼養(yǎng)200-300g雄性SD大鼠。試驗(yàn)前12小時(shí)不給大鼠喂食，但給它們充足的水。將108只SD大鼠隨機(jī)分為6組，每組分別在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)（8、16和24小時(shí)）進(jìn)行功效測(cè)試：（1）對(duì)照組：TBI后對(duì)大鼠進(jìn)行灌胃通過(guò)氯化鈉（n = 6）給予等量的生理鹽水（0.9％）；（2）假手術(shù)組：大鼠進(jìn)行了相同的手術(shù)，只是大腦皮層完整（ ＝ 6）；（3）12g/kg大黃治療組：同一創(chuàng)傷大鼠口服大黃（n ＝ 6）；（4）6g/kg大黃組：同一創(chuàng)傷大鼠后口服大黃。 （N ＝ 6）；（5）3g/kg大黃組：在相同的外傷大黃組之后對(duì)大鼠口服大黃（n ＝ 6）；（6）12mg/kg的雨水組：在對(duì)大鼠相同的外傷后口服（n = 6）。皮層電刺激（CCI）用于建立大鼠顱腦損傷模型。用麻醉雄性SD大鼠，并用3D火焰氣錘操作。此后，在顱骨右側(cè)的中央空間側(cè)進(jìn)行手術(shù)，用手上的環(huán)戊烷打開(kāi)前reg和λ之間的中心，僅損傷實(shí)驗(yàn)大鼠的腦表面的一側(cè)。損壞指數(shù)的碰撞深度為5毫米，持續(xù)500毫秒，每秒6米。我們還對(duì)對(duì)照大鼠進(jìn)行了開(kāi)顱手術(shù)，但并未損害大鼠大腦。然后縫合傷口，將大鼠蘇醒并放置在加熱墊上30-60分鐘以維持正常的體溫。每天觀察受傷的小鼠至少4個(gè)小時(shí)。

     UPLC-MS/MS檢測(cè)CCI大鼠腦組織中的大黃酸：向CCI大鼠口服大黃以測(cè)量腦組織中吸收的化合物，并通過(guò)UPLC-MS/MS測(cè)定離子峰和保留時(shí)間我測(cè)量了將大黃（3 g/kg，6 g/kg，12 g/kg）和大黃酸（12 mg/kg）灌胃給予CCI大鼠。胃內(nèi)給藥后，在第8、16和24小時(shí)處死每組大鼠。將大鼠麻醉并以400 mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射10％水合氯醛。 30分鐘后，處死動(dòng)物，收集腦樣本，用足夠的冰冷的DD水洗滌腦組織樣本，然后加入4 ml冰甲醇進(jìn)行勻漿。在4°C下以3000pm離心勻漿10分鐘。離心后，將混合物蒸發(fā)至干，并在37℃下用氮?dú)饣厥丈锨逡?。提取液?00μL20％甲醇溶解，溶液在4°C下以15000pm離心15分鐘。離心后，用0.22μm尼龍過(guò)濾器過(guò)濾上層。將5μL注入U(xiǎn)PLC-MS/MS系統(tǒng)并進(jìn)行分析。

      估計(jì)氧化和抗氧化狀態(tài)：用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)量超氧化物歧化酶活性：使用試劑盒測(cè)量總SOD活性。在450nm的波長(zhǎng)下測(cè)量液體的吸光度?；钚酝ㄟ^(guò)蛋白質(zhì)的量校正，并表示為控制時(shí)間。讀取450m處的吸光度，并使用以下公式計(jì)算SOD活性：[（對(duì)照值的空白值）-（樣品的空白值）] /（對(duì)照值的空白值）x 2 x（總體積/體積）/蛋白質(zhì)濃度。使用mg/mg蛋白表達(dá)SOD活性。

      過(guò)氧化氫酶活性的測(cè)量：根據(jù)測(cè)試試劑盒的說(shuō)明書(shū)測(cè)量CAT的活性。在450m波長(zhǎng)下測(cè)量測(cè)試溶液的吸光度。使用摩爾Mmol過(guò)氧化氫消耗/分鐘/ mg來(lái)表達(dá)酶活性。

      MDA含量測(cè)定：使用試劑盒測(cè)定MDA。要確定MDA含量，請(qǐng)使用（TBA）方法。谷胱甘肽活性和氧化型谷胱甘肽水平的測(cè)量：活性谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽均根據(jù)GSH/GSSG檢測(cè)試劑盒進(jìn)行操作。 10分鐘后，在分光光度計(jì)上記錄405m的吸光度并計(jì)算GSH/GSSG比?？侴SH含量表示為μmol/ mg蛋白質(zhì)。結(jié)果：抗氧化測(cè)試作用Rhubarb和Lein顯著增加了CCI大鼠腦組織中的SOD水平：與假手術(shù)組相比，CCI大鼠的SOD活性明顯降低。與對(duì)照組相比，在不同時(shí)間點(diǎn)（16小時(shí)和24小時(shí)），大黃（12 g/kg）和大黃酸（12 mg/kg）顯著增加了SOD水平。與對(duì)照組相比，在大黃（6 g/kg）的不同時(shí)間點(diǎn)（16 h和24 h），SOD水平顯著增加。與車輛組相比，雨水（12 mg/kg）在8小時(shí)內(nèi)增加了SOD含量。大黃（3g/kg和6g/kg）在8小時(shí)時(shí)與載劑組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。hubarb和Rein顯著增加CCI大鼠腦組織中的CAT水平：與假手術(shù)組相比，CCI大鼠中CAT活性顯著降低。結(jié)果表明，大劑量大黃（12g/kg）和16h大黃酸（12mg/kg）分別在8h和16h后顯著增加了CAT活性。與媒介物組相比，該線（12 mg/kg）在不同時(shí)間點(diǎn)（8小時(shí)和24小時(shí)）增加了CAT水平。在不同時(shí)間點(diǎn)（8、16、24小時(shí)），大黃（3 g/kg）與對(duì)照組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大黃和大黃酸可以顯著降低CCI大鼠腦組織的MDA含量：與假手術(shù)組相比，CCI大鼠的腦MDA含量顯著增加。高劑量大黃（12g/kg）和大黃酸（12mg/kg）16和24小時(shí)后，MDA活性顯著降低。與治療組相比，大黃（6g/kg）和大黃酸（12mg/kg）可以在16小時(shí)和24小時(shí)時(shí)顯著降低MDA含量（12mg/kg）。大黃（3g/kg，6g/kg）在8小時(shí)內(nèi)與賦形劑組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。最大的變化發(fā)生在24小時(shí)內(nèi)。hubarb和Rein顯著增加CCI大鼠腦組織中的GSH含量和GSH/GSSG比。腦損傷可降低CCI大鼠的GSH含量和GSH/GSSG比，并增加GSSG。結(jié)論：線是大黃灌胃后CCI大鼠大腦中的活性成分。該產(chǎn)品線與大黃在創(chuàng)傷性腦損傷治療中的抗氧化能力相似（通過(guò)增加SOD，CAT活性，GSH水平和GSH/GSSG比，以及降低MDA和GSSG）。

      結(jié)果表明，大黃和大黃酸可以作為神經(jīng)保護(hù)劑治療TBI。